2018年諾貝爾化學獎頒發, 授予美國科學家弗朗西絲·阿諾德和喬治·史密斯以及英國科學家格雷戈里·溫特等3名科學家,表彰他們實現了多肽和抗體的噬菌體展示技術。這次噬菌體成為諾貝爾化學獎的關鍵,不是因為其抑菌作用,而是因為有人將其變成了能夠展示外源性基因片段編碼蛋白及其功能的“展柜”。
1985年,Science發表題為“絲狀融合噬菌體:可以在病毒表面表達克隆抗原的新表達載體”研究文章,首次闡述了噬菌體展示技術,這標志著一種可用于大規模高通量蛋白質之間相互作用研究(特別是進行抗原表位和特異性抗體的篩選與鑒定)的新型表達載體系統誕生了。隨后的研究在此基礎上,將噬菌體展示技術應用于抗體改造等生物學領域的研發,極大的推進了疫苗和基因工程化抗體等新型生物制品的研究進展,使得抗體藥物的研發有了突破性進展。

噬菌體展示
噬菌體展示技術(phage display technology)本質是一種篩選技術,核心應用是展示抗體。將不同的外源基因插入噬菌體載體,隨著噬菌體傳代,外源蛋白展現在噬菌體表面,形成噬菌體文庫。用特定蛋白對噬菌體文庫進行篩選,可快速得到與該蛋白具有高度親和力的抗體。篩選出的抗體可進一步用于生物學功能研究。
? ? ? ?將一段外源基因插入到噬菌體外殼蛋白結構基因的適當位置,在閱讀框正常且不影響外殼蛋白正常功能情況下,外源基因會隨著外殼蛋白的表達而表達,從而使多肽或蛋白以融合蛋白的形式展現在噬菌體表面。

?被展示蛋白可保持相對獨立的空間結構和生物活性,有利于與靶蛋白結合,因而可以利用靶蛋白快速的進行噬菌體展示抗體庫的篩選。在展示文庫構建完成后,以靶蛋白為固定相,和展示文庫共同孵育一段時間,洗去未結合噬菌體,再以競爭受體洗脫吸附的噬菌體。洗脫得到的噬菌體感染宿主菌繁殖擴增,然后進行下一輪洗脫。經過3~5輪的“吸附-洗脫-擴增”后(對于某些親和力弱的抗體需經過更多輪的洗脫),便可以得到能與靶蛋白特異性結合的噬菌體的高度富集。
? ? ? 篩選得到的高度親和力的噬菌體集合中可能含有多個克隆,可以利用ELISA或Westen Blot進一步對得到的外源蛋白進行篩選,或對蛋白進行鋪盤分離單克隆菌株,從而得到特異性的單克隆抗體,進而進行生物學方面研究。

噬菌體展示技術與其他抗體制備技術對比
? ? ? 噬菌體展示系統分單鏈絲狀噬菌體展示系統(M13)、T4噬菌體展示系統、λ噬菌體、T7噬菌體展示系統。


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戴安生物-噬菌體展示抗體文庫服務
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服務簡介

5. 可發酵大量生產得到的抗體;
6. 可獲得人源化抗體。

服務特色
·?從設計到篩選的一站式服務,下游可銜接真核及原核表達系統,可大量表達IgG,VHH,scFv,Fab等形式的抗體分子
·?已建成多樣性大于1010的天然人源抗體庫,天然納米抗體庫(包含羊駝,美洲駝,駱駝),及兔抗體庫,可供客戶直接篩選使用
·?可按照客戶要求,構建多個物種的免疫抗體庫和不同形式的天然抗體庫,可構建scFv、Fab、?VHH等不同抗體形式的抗體庫。
服務內容

案例展示

富集后篩選陽性納米抗體(VHH)

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